動態濁度法定量檢測清開靈注射液中細菌內毒素

來源：http://www.ssygc.com/ 作者：余氯檢測儀 時間：2019-01-04

　　[摘要] 目的：建立定量檢測清開靈注射液中細菌內毒素的方法。方法：采用《中國藥典》2005年版二部附錄中的動態濁度法檢測細菌內毒素。結果：用此法檢測時無干擾因素影響，內毒素回收率為50%~200%。結論：使用動態濁度法定量檢測清開靈注射液中細菌內毒素是可行的，此方法既可避免兔熱原檢查法操作復雜的缺點，同時又避免了限量法檢測內毒素時的干擾。

　　[關鍵詞] 清開靈注射液;細菌內毒素;動態濁度法;干擾試驗

　　[中圖分類號]R927.12 [文獻標識碼]B [文章編號]1673-7210(2009)03(a)-057-02

　　清開靈注射液為中藥注射劑，是安宮牛黃丸的改型制劑。臨床上用于治療熱病神昏、中風偏癱、意識不清，也可用于急慢性肝炎、乙型肝炎、上呼吸道感染、肺炎、高熱以及腦血栓形成、腦出血見上述癥狀者，其臨床應用廣泛、用量大，又為中藥制劑，因而對其進行熱原控制具有重要意義。因細菌內毒素限值檢查具有較大的干擾性，而選用動態濁度法測定細菌內毒素可消除干擾，結果準確、可靠。該品種部頒規定的檢查項是熱原檢查，本法參照《中國藥典》2005版二部附錄中細菌內毒素的檢查法，對清開靈注射液中細菌內毒素檢查法的可行性進行探索，旨在建立一種快速檢測該注射液的方法，并對其進行添加內毒素回收試驗及熱原檢查對比試驗，來證實此法的可行性。

　　1儀器與試藥

　　BET-32C細菌內毒素測定儀(天津大學無線電廠);清開靈注射液(批號20070204、20070607、20070512，河北神威藥業有限公司);TAL試劑(批號20070206，λ為0.03 EU/ml，規格0.5 ml/Amp，湛江海洋生物制品檢定廠);細菌內毒素標準品(批號2007-7，120 EU/Amp，中國藥品生物制品檢定所);細菌內毒素檢查用水(批號20061208，規格10 ml/Amp，湛江海洋生物制品檢定廠)。

　　2方法與結果

　　2.1 細菌內毒素限值的確定

　　公式為L=K/M，K為規定的給藥途徑，即人均每千克體重每小時可接受的最大內毒素劑量，注射劑規格為5.0 EU/kg;M為1 h每千克體重的最大給藥劑量，為10 ml/kg，清開靈注射液的人均最大給藥量為40 ml。中國人的體重按60 kg計，計算得樣品的內毒素限值L為7.5 EU/ml。

　　2.2 標準曲線的制備

　　用細菌內毒素檢查用水將內毒素標準品稀釋240～1 200倍，最終得細菌內毒素濃度為0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5、0.031 3 EU/ml的系列稀釋溶液;各取0.1 ml分別加入預先加有0.1 ml TAL試劑的反應管內，混合均勻，立即插入BET-32C細菌內毒素測定儀內進行自動檢測，其中每一個濃度重復3管。結果見表1。

　　得回歸方程lgT=3.112-0.320 2lgC，其中相關系數r=-0.998 6，最低濃度λ1=0.031 3 EU/ml，空白對照管在檢測時間外，故標準曲線成立。

　　表 1 標準曲線的相關信息

　　2.3干擾試驗

　　2.3.1 樣品稀釋倍數的計算公式為MVD=(L?C)/λ1。L為清開靈注射液內毒素限值，C為1.0 ml/ml，λ1為標準曲線的最低內毒素濃度0.031 3 EU/ml，計算得清開靈注射液最大有效稀釋倍數MVD為240倍。

　　2.3.2 樣品溶液的配制及干擾試驗將清開靈注射液用內毒素檢查用水依次稀釋為30、60、120、240倍的溶液，記為A1液;同時，另取4管，進行相同倍數稀釋，但在稀釋液中添加濃度為M(4λ1)的細菌內毒素標準溶液，作為樣品添加內毒素陽性對照管，記為B1液;分別取上述各液0.1 ml，加入預先加有0.10 ml TAL試劑的反應管內，混勻立即插入BET-32C細菌內毒素測定儀內進行檢測，其中每一個濃度重復3管，計算回收率。回收率(%)=(B1液內毒素值-A1液內毒素值)/M×100%。結果見表2。

　　樣品添加內毒素的平均回收率均在50%~200%范圍內，符合《中國藥典》2005年版有關規定，表明樣品的4個不同濃度溶液對TAL無干擾。

　　表 2 清開靈注射液的干擾試驗

　　2.4 樣品溶液的回收率試驗

　　分別取3批清開靈注射液，用細菌內毒素檢查用水制成4倍稀釋液，記為A2液;同時，另取4管進行4倍稀釋，并在稀釋液中添加濃度為M(4λ1)的細菌內毒素標準溶液，記為B2液;分別取上述各液0.1 ml，加入預先加有0.10 ml TAL試劑的反應管內進行檢測，其中，每一個濃度重復3管，計算回收率。結果見表3。

　　3批清開靈注射液的回收率均在50%~200%范圍內，表明清開靈注射液在本實驗條件下對TAL試劑無干擾影響，因此日常檢驗選用240倍即可。

　　表 3 清開靈注射液的回收率試驗

　　同時，進行3批供試品的家兔熱原檢查對比試驗，結果一致，均為陰性。

　　3討論

　　從清開靈注射液的干擾試驗結果可知，用細菌內毒素動態濁度法檢測時，由于內毒素回收率在50%~200%范圍內，表明不存在干擾因素的影響，且3批清開靈注射液的內毒素含量均在規定限度7.5 EU/ml以下。

　　用傳統的家兔法檢測細菌內毒素，由于操作復雜、影響因素多，對試驗結果影響很大;動態濁度法具有操作簡便、結果準確、檢測靈敏度高等優點，避免了由于家兔及人為主觀判斷差異所導致的假陽性或假陰性結果。經過對比試驗，樣品的細菌內毒素定量檢測結果與家兔熱原檢測結果一致，說明使用細菌內毒素動態濁度法測定清開靈注射液中細菌內毒素是可行的。

　　[參考文獻]

　　[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].二部(附錄XI E).北京:化學工業出版社,2005.85.

　　[2]EP Supplement[S].2000,41.

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