免疫濁度分析方法

來源：http://www.ssygc.com/ 作者：余氯檢測儀 時間：2018-12-24

　　【關(guān)鍵詞】 免疫濁度分析;鉤狀效應(yīng)

　　在免疫濁度分析中，抗原、抗體形成的沉淀量起初隨著樣本濃度的增加而增加，但當(dāng)樣本濃度過高時，沉淀量隨著樣本濃度的增加反而減少，使反映信號弱化，信號-劑量(濃度)曲線呈鉤狀現(xiàn)象，而儀器是據(jù)沉淀量蟬翼的濁度計算結(jié)果的，因此當(dāng)樣本濃度過高，測出的結(jié)果必然不準確。為此，我們以ApoA1為例，通過對儀器試劑測量范圍極限值上限和儀器自動稀釋重做功能進行設(shè)置，探討免疫濁度分析中鉤狀效應(yīng)的防范。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料 選取我院2004年4～12月門診及住院樣本中ApoA1超過測量范圍上限的樣本12例。儀器及試劑采用OLYMPUS AU400生化分析儀和浙江伊利康生物技術(shù)有限公司試劑(批號：04112)。校準液及質(zhì)控品采用浙江伊利康生物技術(shù)有限公司校準液(批號：04112)和北京中生北控物公司質(zhì)控產(chǎn)品(批號：022321)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 儀器校準 每周用伊利康校準液對OLYMPUS AU400生化分析儀校正1次。

　　1.2.2 質(zhì)量控制 中生公司控品在OLYMPUS AU400上每日進行室內(nèi)質(zhì)控，用平時建立的質(zhì)控圖對質(zhì)控結(jié)果進行監(jiān)測，當(dāng)質(zhì)控結(jié)果符合要求后方可開始本樣本測定。

　　1.2.3 實驗方法 首先對儀器的試劑測量范圍上限和儀器自動稀釋重做功能進行設(shè)置，然后對設(shè)置前超過測量范圍上限的樣本進行設(shè)置前后測定值比較并進行配對資料的符號秩和檢驗。

　　1.2.4 儀器設(shè)置 ApoA1試劑測量范圍極限值(Dynanic)上限設(shè)為2.20，自動重復(fù)(Auto repeat)和重復(fù)數(shù)據(jù)覆蓋(Repeat Data Overwrite)都選擇Yes，稀釋或模式(Diluted OR Mode)中選中F，特殊重復(fù)(Repeat special)中實驗項目(Test Name)選擇為ApoA1,稀釋(Diluted)樣本體積(Sample Volume)仍設(shè)為2，系統(tǒng)(System)下試驗申請(Test Requisition)中常規(guī)(Routine)設(shè)為架子編號方式(Rack NO.)，自動/標準重復(fù)(Auto/Standard Repeat)設(shè)為Auto。

　　1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)比較采用秩和檢驗和t檢驗。

　　2 結(jié)果

　　對儀器試劑測量范圍極限值上限和儀器自動稀釋重做。

　　對樣本儀器設(shè)置前后測定值進行配對資料的符號秩和檢驗，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05=，儀器設(shè)置后測定組與設(shè)置前且人工對倍稀釋測定組測定值進行配對資料t檢驗，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

　　3 討論

　　試劑的檢測范圍是0.50～2.20 g/L，當(dāng)樣本濃度超過2.20 g/L時檢測出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，則應(yīng)將樣本人工或儀器自動做1∶1稀釋后測定，因此將測量范圍極限值上限設(shè)為2.20 g/L，本研究主要探討儀器自動稀釋功能。當(dāng)測定樣本濃度大于4.40 g/L時，即使通過儀器自動稀釋(因設(shè)置對倍稀釋)后的測定樣本濃度讓大于測量范圍極值上限2.20 g/L的檢測同樣存在鉤狀效應(yīng)，因此，當(dāng)樣本濃度高于4.40 g/L，通過儀器自動稀釋功能測定的樣本結(jié)果與樣本真值之間仍存在較大的差異，此時必須加大樣本的稀釋倍數(shù)。

　　通過對儀器設(shè)置前超過測量范圍上限的樣本進行設(shè)置前后測定值比較可知，ApoA1低于4.40 g/L的樣本在儀器設(shè)置前后測定值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);通過對儀器設(shè)置后測定組與設(shè)置前且人工對倍稀釋測定組測定值無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)及免疫濁度分析原理可知，設(shè)置后測定組比設(shè)置前測定組樣本測定值更接近樣本真值。

　　通過儀器的設(shè)置，濃度低于4.40 g/L的ApoA1樣本，儀器均可以自動測定，不需要每個樣本專門添加復(fù)原來檢測是否存在鉤狀現(xiàn)象，不用在儀器不報警的情況下人工檢查結(jié)果或結(jié)果標記，不用人工稀釋樣本，操作簡便、準確。

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